POLCAM即时分子取向显微镜 | Nature Methods

单分子取向定位显微镜single-molecule orientation localization microscopy (SMOLM) 方法，目前需要光学设置和算法，从而使得成像过程非常缓慢和复杂，也限制了生物应用的广泛采用。

近日，英国 剑桥大学（University of Cambridge）Ezra Bruggeman，Steven F. Lee等，在Nature Methods上发文，提出了POLCAM：基于偏振相机偏振检测的简化单分子取向定位显微镜SMOLM方法，可很容易地实现在任何宽场荧光显微镜上。

为了使偏振相机与单分子检测兼容，开发了理论来最小化视场误差，使用模拟来优化实验设计，并开发了一种基于斯托克斯参数估计的快速算法，该算法的运行速度比现有技术快1000倍以上，实现分子各向异性的近即时测定。

为了帮助采用POLCAM，开发了开源图像分析软件和详细介绍硬件安装和软件使用的网站。为了阐明POLCAM在生命科学中的潜力，这种方法应用于研究α-突触核蛋白纤维、哺乳动物细胞的肌动蛋白细胞骨架、成纤维细胞样细胞和T细胞质膜。

POLCAM: instant molecular orientation microscopy for the life sciences. POLCAM：用于生命科学的即时分子取向显微镜。

图1: 偏振相机的单分子成像。

图2:单分子检测，实验偏差和精密度。

图3: 体外α-突触核蛋白纤维的TAB-PAINT成像。

图4:固定HeLa细胞中，肌动蛋白dSTORM成像。

图5:通过考虑DSF形状，提高准确度和精度。

图6:使用POLCAM衍射极限偏振显微镜。